SC∕T 7225-2017 草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）检测方法(水产)
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ID： |
C540C320653943718CD646403B3B74A5 |
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文件大小(MB)： |
0.54 |
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13 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-23 |
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ICS 65.020.30,B 41,户:才H,中华人民共和国水产行业标准,SC/T 7225-2017,草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增,(RT-LAMP) 检测方法,Detection method by reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,for grass carp reovirus,2017 -06 一↑ 2 发布2017 -10-01 实施,中华人民共和国农业部发布乓②,刚吕,本标准按照GBj T 1. 1-2009 给出的规则起草,本标准由农业部渔业渔政管理局提出,本标准由全国水产标准化技术委员会CSACj TC 156) 归口,本标准起草单位:浙江省淡水水产研究所,SCj T 7225-2017,本标准主要起草人: 沈锦玉、郝贵杰、潘晓艺、徐洋、袁雪梅、尹文林、姚嘉费、商凌云,I,SC/ T 7225-2017,引,本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及到6 . 3 中RT - LAMP 引物与《草鱼呼肠,孤病毒I 型H 型囚型RT-LAMP 可视化检测试剂盒及其检测方法)) (专利号:201410683383. 7)及《草,鱼呼肠孤病毒I 型H 型皿型RT - LAMP 荧光检测试剂盒及其检测方法)) (专利号: 201410684920. X) 等,相关的专利的使用,本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场,该专利持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下,就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下,联系方式获得:,专利持有人:浙江省淡水水产研究所,地址:浙江省湖州市吴兴区杭长桥南路999 号,请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专,利的责任,E,SC/ T 7225-2017,草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增(RT - LAMP) 检测方法,1 范围,本标准描述了草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增检测的技术原理，规定了试剂和材料、器材和,设备、操作步骤及结果判定,本标准适用于草鱼呼肠,2 规范性引用文件,下列文件对于本,件。凡是不注日期,3 缩略语,AMV,RdRp:,RNA:,RTtion),4 技术原理,、,分别根据草鱼,外引物及环状引物♂,RdRp 基因序列启动互,结果,5 试剂和材料,1 amplifica,特异性内引物、,环链置换反应，在,过颜色变化观察判定,5.1 水: 应符合GB/ T 6682 中一级水的要求; DEPC7j(自配(见附录B 中B. l)或购买商品化产品,5. 2 阳性对照: 各基因型病毒阳性组织、细胞培养物或含目的片段的RNA ,5. 3 RT - LAMP 引物:引物分为A 、B 、C 三组， A 为基因I 型， B 为基因H 型， C 为基因皿型，序列参见,附录A 。各组引物10 倍浓缩液浓度分别为: F3 / B3 2μmo l/ L 、FIP/ BIP 16μmo l/ L 、LF/ LB 8μmo l/ L;,引物浓缩液D 为三组引物混合配置，浓度同A 、B 、C 。一20 0C 保存备用,5. 4 Bst 酶:一20 0C 保存，酶浓度为8 U / μL ，避免反复冻融,5.5 AMV 酶: 一20 0C 保存，浓度为5 U / μL ，避免反复冻融,5.6 10 X ThemoPol 聚合酶缓冲液:一20 0C 保存，含O. 2 mol/ L Tris - HCl 、O . 1 mol/ L KCl 、O . lmo l/ L,SC;T 7225-2017,CNH4 )2S04 , 20 mmol/ L MgS04 和1% Triton X - 100 ,5. 7 硫酸镜溶液CMgS04 ) :一20 0C 保存，浓度为100 mmol/ L ,5. 8 甜菜碱: 浓度为5 mol/ L ， 一20 0C 保存，避免反复冻融(见B. 2) ,5.9 dNTP: -20 0C 保存，含dCTP 、dGTP 、dATP 、dTTP 各10 mmo l/ L ,5. 10 RT - LAMP 反应密封液:购买商品化产品，一20 0C 保存，无RNA 酶的矿物油,5. 11 SYBR Green 1 荧光染料溶液: 一20 0C 保存， 10000 X 染料溶液,5. 12 磷酸盐缓冲液CPB曰: 浓度0 . 01 mol/L,pH 7 . 2 ，常温保存(见B. 3) ,5. 13 Trizol 试剂:4 0C 保存,5. 14 三氯甲皖:分析纯试剂，常温保存,5. 15 异丙醇:分析纯试剂，使用前预冷至20 0C ,5. 16 75 % 乙醇:用新开启的无水乙醇和DEPC 水配制，使用前预冷至20 0C ,6 器材和设备,6. 1 -20 oC 普通冰箱,6. 2 剪刀、慑子、解剖刀等解剖用具,6.3 无菌研钵或研磨棒,6.4 涡旋振荡器,6. 5 微量移液器和吸头,6. 6 台式高速冷冻离心机(最高转速15000 r/ min) 和离心管,6. 7 恒温金属浴或可控温水浴锅,6.8 计时器,6. 9 微波炉,6. 10 高压灭菌锅,7 操你步骤,7.1 采样,7. 1.1 采样对象,草鱼、青鱼等易感鱼类,7. 1.2 水温和数量,应在养殖水温高于20 0C 进行，采样数量应符合SC; T 7103 的要求,7. 1.3 样品采集,按GB/ T 18088 的规定……
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